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植物內源基因tRNALeu核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法SN標準)使用說明
點擊次數:3914 發布日期:2018-5-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

植物內源基因tRNALeu核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法SN標準)

◆ 產品說明

 轉基因檢測系列可針對食品、飼料等樣品中轉基因成分的特異核酸片段進行擴增,通過實時擴增曲線判定結果。本產品用于植物內源基因的檢測,檢出限為0.1%

◆ 產品組成( 48測試)

 

041122M

試劑

含量

A-tRNALeu-P

1000μL × 1支

NG-P

 100μL × 1支

PG-tRNALeu-P

 100μL × 1支

 

 

◆ 適用儀器

    熒光PCR儀(ABI 7500,CFX 96,Mx 3005P,LineGene9600)等PCR擴增儀。

◆ 自備耗材和儀器

    ①滅菌1.5mL或2.0mL離心管;②滅菌0.2mL PCR管或八聯管;③冰盒;④移液器(11-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套滅菌吸頭;⑤離心機;⑥渦旋混勻器;⑦金屬浴;⑧均質機、攪拌機或研缽等研磨器具;⑨電子天平。

◆ 注意事項

1.本試劑檢測靈敏度高。為了防止污染,實驗要分區操作。

   1)第一區:試劑準備區。

   2)第二區:樣本制備區。

   3)第三區:擴增及產物分析區。

   ★ 分區之間最好進行物理性隔離,避免人為因素造成的污染。

2. 實驗過程中穿戴工作服和乳膠手套,使用移液器,試驗產生的所有廢棄物及時處理。

3.嚴格按照操作步驟操作,試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。

4.反應液中的成分對光敏感,應避光保存。試劑使用前要完全解凍,但應避免反復凍融,推薦使用前離心30秒,并按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。

5.反應結束后,擴增管請置于密封袋內丟棄,當日清理,開蓋易造成氣溶膠污染,禁止開蓋。

6.不同批號試劑請勿混合使用,在有效期內使用。

◆ 樣品處理

參照《GB/T 19495.3-2004 轉基因產品檢測 核酸提取純化方法》或其他標準處理樣品,制備的樣本保存待用。

詳細步驟請按照標準操作或查閱食安通軟件。

◆ 實驗操作

將試劑完全解凍,各組分離心30s。

1.試劑配制(試劑準備區,放置于冰盒中進行):

若有N個待檢樣品,則參照下表,按照N+2個數量計算反應液用量(N個待檢樣品+1個陰性對照+1個陽性對照),渦旋混勻,離心30s,分裝于0.2mL PCR管中。

 

試劑

使用量

A-tRNALeu-P

20×(N+2)μL

反應液總體積

20×(N+2)μL

 

 

  1. 模板制備(樣本制備區)

   建議使用配套植物基因組DNA提取系列產品,具體過程詳見產品說明書。

3.添加模板(樣本制備區,放置于冰盒中進行)

   在步驟1中已含有反應液的PCR管中分別加入5μL模板,順序為NG-P、待測樣品模板、PG-tRNALeu-P。

渦旋混勻30s,離心1min,立即進行PCR擴增反應。

4. 擴增反應(擴增及產物分析區)

   使用熒光定量PCR儀,熒光基團選擇FAM,淬滅基團選擇TAMRA。

   按下列條件設置擴增反應:

 

PCR循環

熒光收集位點

  95℃  

10分鐘

1個循環

  95℃   

15秒

40個循環

  60℃   

1分鐘

 

 

6.基線和閾值設定

  基線調整取3-15個循環的熒光信號,閾值線應超過陰性對照擴增曲線的最高點

◆ 結果判定

檢測樣品無Ct值,曲線為直線或輕微斜線,無“S”型擴增曲線,可報告樣品陰性,不含有植物成分或含量低于檢測限;

檢測樣品Ct≤30,曲線呈“S”型擴增曲線,可直接報告樣品陽性,含有植物成分;

檢測樣品30<Ct≤40,需進行一次重復實驗,若Ct值仍處于30和40之間且呈“S”型擴增曲線,同時陰性對照無Ct值,報告樣品陽性,否則報告樣品陰性。

  • NG反應為平滑直線,PG反應為“S”型擴增曲線,此次檢測結果有效,否則無效。如重復檢測結果仍為無效,請與技術支持人員聯系。
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來源:上海一基實業有限公司
聯系電話:021-61119791
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